МОЧЕВАЯ КИСЛОТА АГАТ

Инструкция для печати (в формате pdf)

Набор предназначен для количественного колориметрического определения мочевой кислоты в сыворотке, плазме крови и в моче человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях.

Набор рассчитан на проведение 165 определений при общем объеме реакционной смеси 3,6 мл на один анализ.

Мочевая кислота восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации мочевой кислоты в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны 640 (590–700) нм.

1. Натрий вольфрамовокислый, двухводный, 5 г – 1флакон;

2. Натрий карбонат, 20,6 г – 1 упаковка;

3. Фосфорновольфрамовый реактив, 100 мл – 1 флакон;

4. Основной калибровочный раствор мочевой кислоты, (6 ммоль/л), 2,5 мл – 1 флакон.

Линейная область определения концентрации мочевой кислоты – в диапазоне от 100 до 2000 мкмоль/л, отклонение от линейности – не более 5%.

Чувствительность определения – не более 20 мкмоль/л.

Воспроизводимость: коэффициент вариации – не более 5%.

Для оценки правильности определения можно использовать контрольные сыворотки, аттестованные данным методом.

Нормальные величины концентрации мочевой кислоты составляют:

для сыворотки и плазмы крови:

– мужчины 240–500 мкмоль/л;

– женщины 160–400 мкмоль/л.

– дети 1120–330 мкмоль/л;

для мочи: 1,5–4,5 ммоль/сут.

Качество набора можно оценивать по контрольным сывороткам отечественного или зарубежного производства, аттестованным данным методом.

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

При работе с набором необходимо соблюдать правила техники безопасности, рекомендуемые при работе с кровью в соответствии с «Инструкцией по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений», утвержденной Минздравом СССР 17.01.91 г., и «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (М., 1981 г.).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять или передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

 

– Спектрофотометр, длина волны 640 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 590–700 нм (красный светофильтр), кювета с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм;

– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,25; 0,50; 0,60; 1,0; 2,0 и 4,0 мл;

– центрифуга лабораторная на 3000 об/мин;

– пробирки центрифужные пластиковые одноразовые вместимостью 5–10 мл;

– секундомер;

– вода дистиллированная;

– кислота серная концентрированная (98%), хч;

– перчатки резиновые или пластиковые.

Сыворотка крови.

Плазма крови. Не использовать оксалат.

Моча суточная. Не охлаждать. Добавить NaOH для сохранения щелочной реакции мочи. Перед определением развести дистиллированной водой в 10 раз.

1. Раствор серной кислоты, 0,35 моль/л. В мерную колбу вместимостью 50 мл наливают 20 мл дистиллированной воды, 1,00 мл концентрированной серной кислоты и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор стабилен.

2. Раствор натрия вольфрамовокислого. Содержимое флакона с натрием вольфрамовокислым количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор стабилен.

3. Раствор натрия карбоната. Содержимое упаковки с натрием карбонатом количественно переносят в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяют в дистиллированной воде, и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор стабилен.

4. Рабочий калибровочный раствор мочевой кислоты. Отмеряют точно 1,00 мл основного калибровочного раствора мочевой кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 200 мл и доводят объем дистиллированной водой до метки. Раствор стабилен в течение 2 недель при хранении при температуре +2–8° С. Полученный раствор содержит 30 мкмоль/л мочевой кислоты.

Компоненты реакционной смеси внести в центрифужные пробирки в количествах, указанных в таблице:

Содержимое пробирок тщательно перемешать, инкубировать при комнатной температуре (+18–25° С) в течение 30 минут, после чего измерить величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной (холостой) пробы при 640 нм (590–700 нм, красный светофильтр) в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Окраска устойчива в течение 30 минут.

Концентрацию мочевой кислоты рассчитать по формуле:

          Eо             Eо

С = --------- x 30 x 10 =   ----------  x 300 ,

          Eк             Eк

где: С – концентрация мочевой кислоты в опытной пробе, мкмоль/л;

Eо – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.;

Eк – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.;

30 – концентрация мочевой кислоты в рабочем калибровочном растворе, мкмоль/л;

10 – пересчет на разбавление образца.

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25° С не более 5 суток. 

Срок годности набора – 1 год.

Приготовленные раствор серной кислоты, раствор натрия вольфрамовокислого, раствор натрия карбоната, а так же фосфорновольфрамовый реактив можно хранить в плотно укупоренном виде в стеклянной или пластиковой посуде при температуре до +25° С в течение всего срока годности набора.

Основной калибровочный раствор мочевой кислоты после вскрытия флакона можно хранить в плотно укупоренном виде в темном месте при температуре +2–8° С не более 6 месяцев.

Приготовленный рабочий калибровочный раствор мочевой кислоты можно хранить в плотно укупоренном виде в темном месте при температуре +2–8° С не более 2 недель.

Инструкция составлена: к.б.н. И.В. Смирновым – зав. лабораторией ГНЦ РАМН, В.В. Гладуном – главным технологом ООО «Агат-Мед».