БИЛИРУБИН ОБЩИЙ fast 100 АГАТ

Инструкция для печати (для печати pdf)

ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения
общего билирубина в сыворотке крови
модифицированным методом Ендрашика-Грофа 

НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного колориметрического определения концентрации билирубина в сыворотке крови человека модифицированным методом Ендрашика-Грофа в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

Набор рассчитан на проведение 100 определений при расходе 1,0 мл рабочего раствора на один анализ, включая холостые пробы. 

ПРИНЦИП МЕТОДА
Билирубины, прямой (коньюгирован с глюкоронатом) и непрямой (неконьюгированый, связанный с альбумином), в присутствии кофеина и детергента, соединяются с диазотированной сульфаниловой кислотой. Образуется азосоединение, окрашенное в красный цвет, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.

Термины «прямой» и «общий» относятся к реакционным характеристикам сывороточного билирубина в отсутствии или присутствии растворяющего (ускоряющего) реагента (акселератора), которые только приблизительно являются эквивалентами коньюгированной и неконьюгированной фракций билирубина.

СОСТАВ НАБОРА
1. АТ реактив, (сульфаниловая кислота – 14 ммоль/л, соляная кислота – 100 ммоль/л, кофеин – 200 ммоль/л, бензоат натрия – 420 ммоль/л, детергент Brij 35–35 г/л), 100 мл – 2 флакона;
2. ВТ реактив (нитрит натрия – 310 ммоль/л), 10 мл – 1 флакон;
3. Калибратор (лиофильно высушенный раствор билирубина в альбумине с концентрацией в интервале 100–130 мкмоль/л), 2 мл – 1 флакон.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Линейная область определения концентрации билирубина: 8–452 мкмоль/л, отклонение от линейности – не более 8%. 
Чувствительность определения: не более 3 мкмоль/л. 
Воспроизводимость: коэффициент вариации – не более 8%.

 Нормальные величины концентрации общего билирубина в сыворотке крови составляют:
– для взрослых:                                 до 8,5–20,5 мкмоль/л;
– при рождении:                                до 85,5 мкмоль/л;
– для новорожденных (5 дней):        до 205 мкмоль/л;
 – для новорожденных (1 месяц):      до 25,6 мкмоль/л.

Качество набора можно оценивать по контрольным сывороткам отечественного или зарубежного производства, аттестованным данным методом. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
АТ реактив содержит едкие вещества. В случае попадания раствора на кожу и (или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается. Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. При работе с сывороткой или плазмой крови необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированые.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
– Анализатор, спектрофотометр, или фотометр, длина волны волны 546 нм или светофильтр в диапазоне 520–560 нм;
– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,1 и 1,0 мл;
– пробирки центрифужные или флаконы вместимостью 5–10 мл;
– секундомер;
– вода дистиллированная;
– перчатки резиновые или пластиковые.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Свежая негемолизированная сыворотка крови, свежая плазма стабилизированная ЭДТА или гепарином. Билирубин стабилен в течение 3-х дней при хранении при +2–8° С при хранении образца в защищенном от света месте.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА
АТ и ВТ реактивы. Растворы готовы к применению.
Калибратор. Аккуратно вскрыть флакон с лиофилизатом. Добавить точно 2,0 мл дистиллированной воды. Перемешать, не допуская вспенивания. Через 10 минут калибратор готов к применению. Точная концентрация указана на флаконе.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Компоненты реакционной смеси внести в пробирки в количествах, указанных в таблице:

Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать при температуре +18–25° С в течение 10–30 минут *. Измерения проводить при длине волны 546 (520–560) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Измерить величину оптической плотности калибровочной Ек и опытных проб Еоп против соответствующих холостых проб. Окраска устойчива в течение 1,5 часов после окончания инкубации.

Определить по калибратору билирубина фактор (F) по формуле:

              Ск

  F =  -------------- ,

              Eк

где:  Ск – концентрация билирубина в калибраторе (указана на флаконе), мкмоль/л;
        Eк – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.
        Содержание общего билирубина определить по формуле: 

  С = Eоп х F,

 где:  Eоп – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.
         F – фактор пересчета оптической плотности в мкмоль/л.

Примечание: При проведении большого количества анализов для удобства работы можно смешать реактивы АТ и ВТ в соотношении 20:1 и полученный рабочий раствор использовать в течение 8 часов.

* Допускается использование термостатируемой кюветы, т.е. проведение анализа при +37° С. 

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25° С не более 5 суток.
АТ и ВТ реактивы  после вскрытия флаконов могут храниться в укупоренном виде при температуре +2–25° С в течение всего срока годности набора. 

 
Калибратор во флаконе может храниться в укупоренном виде в течение 8 часов при +25° С, 3-х суток при +2–8° С, или 2 недели при –20° С после разведения. Хранить в темном месте! 

 
При концентрации билирубина выше, чем 452 мкмоль/л, исследуемый образец необходимо развести раствором натрия хлористого  9 г/л в соотношении 1:1, повторить анализ, полученный результат умножить на 2.

Срок хранения 2 года при +2–8° С.
Инструкция по применению набора под биохимические анализаторы высылается по запросу.

По вопросам, касающимся приобретения наборов и их качества, просим обращаться по адресу: 105173, г. Москва, ул. Западная, д. 2, стр. 1, ООО «Агат–Мед». Телефон для справок: (495) 777-41-92.

Инструкция составлена: В.В. Гладуном – главным технологом ООО «Агат-Мед», И.В. Тишкиной – научным сотрудником ООО «Агат-мед», И.В. Смирновым – зав. лабораторией ГНЦ РАМН.

Назад к списку инструкций