АЛЬФА-АМИЛАЗА АГАТ

НАЗНАЧЕНИЕ 

Диагностический набор предназначен для количественного определения α-амилазы в биологических жидкостях в клинико-диагностических и биохимических лабораториях. Набор рассчитан на 100 определений, включая контрольные и холостые, при расходе 0,5 мл субстратно-буферного раствора на один анализ. 

α-Амилаза гидролизует крахмал с образованием конечных продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. При взаимодействии крахмала с йодом образуется окрашенный комплекс, оптическая плотность которого при 640 нм пропорциональна концентрации негидролизованного крахмала. Активности α-амилазы оценивают по уменьшению интенсивности окраски.

1. Буферный раствор, 96 мл — 1 флакон;

2. Раствор крахмал-субстрата, 10 мг/мл, 4 мл — 1 флакон;

3. Раствор йода 0,1 Н, 10 мл — 1 флакон;

4. Раствор соляной кислоты 1 Н, 80 мл — 1 флакон. 

Линейность: в интервале от 3,0 до 36,0 мг/(сґл).

Воспроизводимость: коэффициент вариации — не более 10%.

     — в сыворотке (плазме) крови 3,3–8,9 мг/(сґл);

     — в моче до 44 мг/(сґл);

     — в дуоденальном содержимом 1,7–4,4 г/(сґл).

Диапазон нормальных величин рекомендуется уточнять в каждой лаборатории. 

Раствор соляной кислоты 1 Н — едкое вещество. В случае попадания раствора на кожу и (или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается. Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. При работе с сывороткой или плазмой крови необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированые.

— Спектрофотометр, длина волны 640 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 600–700 нм (красный светофильтр), кювета с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм;

— водяной термостат, поддерживающий температуру 37° С;

— пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,01; 0,50; 1,0 и 4,0 мл;

— секундомер;

— цилиндры мерные или кобы вместимостью 25; 100 и 1000 мл;

— пробирки вместимостью 5–10 мл;

— вода дистиллированная;

— перчатки резиновые или пластиковые. 

Свежая сыворотка или ЭДТА — плазма крови. Гемолиз не влияет на активность фермента. Свежая моча или дуоденальное содержимое, предварительно разведенное физиологическим раствором хлорида натрия в 100 раз. 

1. Субстратно-буферный раствор. Смешать буферный раствор и раствор крахмал-субстрата в соотношении 24:1. Субстратно-буферный раствор стабилен в течение 15 дней при температуре 2–8° С.

2. Раствор йода 0,01 Н. Получают разведением 0,1 Н раствора йода дистиллированной водой в 10 раз. Раствор готовят ежедневно.

3. Раствор соляной кислоты 0,1 Н. Содержимое флакона с 1 Н раствором соляной кислоты разводят дистиллированной водой до объема 800 мл. Раствор стабилен. 

В пробирки вносят реактивы по следующей схеме:

Определяют оптическую плотность холостой и опытной проб при 640 нм (600–700 нм, красный светофильтр) относительно дистиллированной воды в кювете с толщиной слоя 10 мм. Окраска стабильна в течение 10 мин. Активность α-амилазы выражают в миллиграммах или граммах крахмала, гидролизованного 1 л исследуемого образца за 1 с инкубации при 37° С. 

Расчет активности α-амилазы производят по формуле:

где: Dх — оптическая плотность холостой пробы;

       Dо — оптическая плотность опытной пробы;

       К — коэффициент разведения образца (если он был разведен).

1 мг/(схл) = 3,6 мг/(часхмл); 1 мг/(часхмл) = 0,278 мг/(схл)

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Срок годности набора — 2 года.

По вопросам, касающимся приобретения наборов и их качества, просим обращаться по адресу: 105173, г. Москва, ул. Западная, д. 2, стр. 1, ООО «Агат—Мед». Телефон для справок: (495) 777-41-92.

Инструкция составлена: к.б.н. И.В. Смирновым — зав. лабораторией ГНЦ РАМН, В.В. Гладуном — главным технологом ООО «Агат-Мед».