ТБК АГАТ

Инструкция для печати (в формате pdf)

Диагностический набор предназначен для количественного определения содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке или плазме крови в клинико-диагностических и биохимических лабораториях. 

Набор рассчитан на 30 определений.

Продукты перекисного окисления липидов образуют с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) окрашенный комплекс, экстрагируемый бутанолом. 

 

 СОСТАВ НАБОРА

1. Тиобарбитуровая кислота, 150 мг – 1 флакон;

2. Ортофосфорная кислота (раствор 1,4%), 100 мл – 1 флакон.

3. n-Бутанол, 120 мл – 1 флакон.

Воспроизводимость: коэффициент вариации в серии – 5%.

Нормальные величины: 2,2–4,8 мкмоль/л или 0,022–0,047 ед.опт. плотности.

Необходимо соблюдать правила техники безопасности, рекомендуемые при работе с кровью в соответствии с «Инструкцией по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений», утвержденной Минздравом СССР от 17.01.91 г.

Негемолизированная сыворотка или плазма крови.

– Спектрофотометр;

– водяная баня на 100° С;

– центрифуга.

Рабочий раствор ТБК. Во флакон с тиобарбитуровой кислотой прибавляют 31 мл дистиллированной воды и растворяют при нагревании до +60° С в течении 10–15 мин. Выпадение осадка после охлаждения не влияет на качество анализа. Перед использованием раствор ТБК нагреть до комнатной температуры.

Раствор стабилен при хранении при +2–8° С 2 месяца.

В пробирки вносят реактивы по следующей схеме:

Пробирки интенсивно встряхивают до образования однородной белой суспензии, имеющий розовый оттенок. Затем пробирки центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин (1800 g). Если после центрифугирования верхний слой бутанола в отдельных случаях не прозрачен, то необходимо повторить центрифугирование, предварительно перемешав верхний слой бутанола стеклянной палочкой. Сразу после центрифугирования отбирают 3 мл супернатанта в чистую пробирку и измеряют оптическую плотность опытной пробы против холостой пробы при двух длинах волн: 535 и 570 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Измерение проводят не позднее 1,5 ч после центрифугирования.

Расчет содержания ТБК-активных продуктов производят по формуле:

D535 – D570

С = ------------------------ x 16 ,

  0,156

где: С –  содержание ТБК-активных продуктов в опытной пробе мкмоль/л;

D535 – оптическая плотность опытной пробы при 535 нм;

D570 – оптическая плотность опытной пробы при 570 нм;

0,156 – коэффициент молярной экстинкции комплекса малоновый

альдегид-ТБК в л/мкмоль/см;

16 – коэффициент разведения сыворотки.

Результат измерения допустимо представлять также в единицах оптической плотности.

 

Набор следует хранить в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–25° С в течение всего срока годности. Срок годности набора – 2 года.

Литература: Uchiyama M., Mihara M. Analyt. Biochem., – 1978, – v.86, – p.271., Mihara M., Uchiyama M. et al, Biochem.,Med, – 1980, – v.23, – p.302.

Инструкция составлена: к.б.н. И.В. Смирновым – зав. лабораторией ГНЦ РАМН, В.В. Гладуном – главным технологом ООО «Агат-Мед».