ХОЛЕСТЕРИН-ФКД АГАТ

Инструкция для печати (в формате pdf) 

ИНСТРУКЦИЯ

Набор предназначен для количественного определения общего холестерина в плазме и сыворотке крови человека энзиматическим колориметрическим методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.

Набор рассчитан на проведение  200 определений при расходе 1,0 мл рабочего реагента на один анализ.

При гидролизе эфиров холестерина холестеринэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся свободный холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестериноксидазы с образованием эквимолярного количество перекиси водорода: последний под действием пероксидазы окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного соединения. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в анализируемом образце и измеряется фотометрически при длине волны 500 (490–540) нм.

1. Ферментно-хромогенная смесь (холестеролэстераза, холестеролоксидаза, пероксидаза, аминоантипирин, гидроксибензол сульфонат натрия, холат натрия, фосфатный буфер) – 10 таблеток;

2. Детергент (10% р-р тритон Х-100), 1 мл – 1 флакон;

3. Калибратор (калибровочный раствор холестерина, 5,17 ммоль/л (200 мг/дл), 1 мл – 1 флакон.

Линейная область определения концентрации холестерина – в диапазоне концентраций от 1,0 до 15,0 ммоль/л, отклонение от линейности – не более 5%.

Чувствительность определения – не более 0,5 ммоль/л.

Воспроизводимость: коэффициент вариации не более 5%.

Стабильность окраски не менее 3 часа.

Для проверки правильности определений рекомендуется использовать отечественные или зарубежные контрольные сыворотки, аттестованные данным методом.

Нормальные величины содержания холестерина в сыворотке и плазме крови человека составляют: 3,5–6,9 ммоль/л.

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Ферментно-хромогенная смесь содержит токсичные компоненты. В случае попадания ее раствора на кожу и (или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается. Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

При работе с сывороткой или плазмой крови необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированные.

 

Проводить в соответствии с местными правилами.

 

– Спектрофотометр, длина волны 500 нм, или фотоэлектроколориметр, (490–540) нм, с толщиной поглощающего свет слоя 10 или 5 мм;

– пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,025–2,0 мл;

– флаконы или пробирки вместимостью 5–10 мл;

– секундомер;

– колбы мерные вместимостью 100 или 200 мл;

– пробирки стеклянные вместимостью 10 мл;

– термостат, поддерживающий температуру +37±1° С;

– вода дистиллированная.

 

Негемолизированная сыворотка крови. Гепаринизированная или ЭДТА плазма. Сыворотку и плазму крови получают обычным образом.

Стабильность образцов:

1 день при 20–25° С

3 дня при 4–8° С

3 месяца         при -20° С.

 

Приготовление рабочего реагента: 10 таблеток ферментно-хромогенной смеси поместить в мерную колбу вместимостью 200 мл. Добавить 150 мл дистиллированной воды и 0,4 мл раствора детергента. Тщательно перемешать до полного растворения таблеток, избегая вспенивания раствора. Довести объем дистиллированной водой до метки. Допускается наличие мелких нерастворенных частиц. В случае их появления, раствору дать отстояться и его аккуратно перелить в чистую емкость. Перенести рабочий реагент в посуду из темного стекла.

Полученный рабочий реагент можно хранить в темном месте в плотно укупоренной посуде при температуре (+2–8° С) не более 7 дней.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Внести в пробирки анализируемые образцы сыворотки или плазмы крови и реагенты по следующей схеме (при использовании анализаторов или кювет с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм):

 

*При работе на фотоколориметре с кюветой с длиной оптического пути 5 мм или 3 мм отношение сыворотки к рабочему реагенту должно составляет 1:100.  Для более точного дозирование сыворотки и калибратора рекомендуется использовать обратный метод пипетирования для  ручных одноканальных дозаторов.

Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 25 мин при комнатной температуре (+18–25° С) или в течение 15 мин при температуре +37° С.

После окончания инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против контрольной (холостой) пробы в кюветах с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 500 (490–540) нм.

Окраска проб стабильна в течение 3 часов после окончания инкубации при условии предохранения от прямого воздействия солнечных лучей.

РАСЧЕТЫ

Расчет концентрации холестерина в анализируемых пробах провести по формуле:

  Eо

С = --------   х  5,17 ,

  Eк

где: С  – концентрация холестерина, ммоль/л;

Eо – оптические плотности опытной пробы, ед.опт.плотн.;

Eк – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.;

5,17  – концентрация холестерина в калибровочной пробе, ммоль/л.

 

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре +25° С не более 5 суток.

Срок годности набора – 12 месяцев.

Рабочий реагент можно хранить при температуре +2–8° С в посуде из темного стекла не более 7 дней при условии достаточной герметизации.

Калибратор после вскрытия флакона плотно укупоренный можно хранить при температуре +2–8° С в темном месте не более 2 месяцев.