Клиническая биохимия Агат
(495) 777-41-92
  • Разработка, производство и реализация диагностических наборов, контрольных материалов для клинической биохимии.
  • Снабжение лечебных учреждений реактивами, расходными материалами и оборудованием.
Прайс-лист

БИЛИРУБИН fast 50

ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения общего и прямого билирубина в сыворотке крови модифицированным методом Ендрашика-Грофа

НАЗНАЧЕНИЕ 
Набор предназначен для количественного колориметрического определения концентрации общего и прямого билирубина в сыворотке крови человека модифицированным методом Ендрашика-Грофа в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и  научно-исследовательской практике. 
Набор рассчитан на проведение 50 определений общего билирубина и 50 определений прямого билирубина при расходе 1,0 мл рабочего раствора на один анализ, включая холостые пробы.

ПРИНЦИП МЕТОДА
Билирубины, прямой (коньюгирован с глюкоронатом) и непрямой (неконьюгированый, связанный с альбумином), соединяются с диазотированной сульфаниловой кислотой в зависимости от присутствия кофеина и детергента. Образуется азосоединение, окрашенное в красный цвет, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации билирубина в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 546 нм.

Термины «прямой» и «общий» относятся к реакционным характеристикам сывороточного билирубина в отсутствии или присутствии растворяющего (ускоряющего) реагента (акселератора), которые только приблизительно являются эквивалентами коньюгированной и неконьюгированной фракций билирубина.

СОСТАВ НАБОРА
1. AT реактив (сульфаниловая кислота – 14 ммоль/л, соляная кислота – 100 ммоль/л, кофеин – 170 ммоль/л, бензоат натрия – 420 ммоль/л, детергент Brij 35 – 35 г/л), 100 мл – 1 флакон;
2. BT реактив (нитрит натрия – 310 ммоль/л), 4 мл – 1 флакон;
3. АD реактив (сульфаниловая кислота – 2,8 ммоль/л, соляная кислота – 50 ммоль), 100 мл – 1 флакон;
4. BD реактив (нитрит натрия – 12 ммоль/л), 4 мл – 1 флакон.
5. Калибратор (лиофильно высушенный раствор билирубина в альбумине с концентрацией в интервале 100–130 мкмоль/л), 2 мл – 1 флакон.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Линейная область определения концентрации
общего билирубина: в диапазоне от 8 до 450 мкмоль/л, отклонение от линейности – не более 8%;
прямого билирубина: в диапазоне от 5 до 450 мкмоль/л, отклонение от линейности – не более 8%.
Чувствительность определения – не более 3 мкмоль/л для прямого и общего билирубина. 
Воспроизводимость: коэффициент вариации не более 8%.
Нормальные величины концентрации в сыворотке крови составляют
для общего билирубина:
– взрослые до 8,5–20,5 мкмоль/л;
– при рождении до 85,5 мкмоль/л;
– новорожденные 5 дней до 205 мкмоль/л;
– новорожденные 1 месяц до 25,6 мкмоль/л;

для прямого билирубина: до 5,2 мкмоль/л.

Качество набора можно оценивать по контрольным сывороткам отечественного или зарубежного производства, аттестованным данным методом.

Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон нормальных величин у обследуемого контингента.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Реактивы AT и AD содержит едкие вещества. В случае попадания раствора на кожу и (или) слизистые необходимо сразу же промыть пораженное место большим количеством воды. Пипетирование per os категорически запрещается. Другие компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

При работе с сывороткой или плазмой крови необходимо соблюдать правила техники безопасности принятые в лаборатории, т.к. образцы человеческой крови следует рассматривать как потенциально инфицированные.

ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
– Анализатор, спектрофотометр или фотометр, длина волны 546 нм или светофильтр в диапазоне 520–560 нм;
– пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,1 и 1,0 мл;
– пробирки центрифужные или флаконы вместимостью 5–10 мл;
– секундомер;
– вода дистиллированная;
– перчатки резиновые или пластиковые.

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Свежая негемолизированная сыворотка крови, свежая плазма стабилизированная ЭДТА или гепарином. Билирубин стабилен в течение 3 дней при хранении образца при температуре +2–8° С в защищенном от света месте.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА
AT реактив. При выпадении осадка реактив необходимо прогреть до комнатной температуры и перемешать содержимое флакона.
BT, AD, BD реактивы. Растворы готовы к применению. 
Калибратор. Аккуратно вскрыть флакон с лиофилизатом. Добавить точно 2,0 мл дистиллированной воды. Перемешать, не допуская вспенивания. Через 10 минут калибратор готов к применению. Точная концентрация указана на флаконе.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Определение общего билирубина
Компоненты реакционной смеси внести в пробирки в количествах, указанных в таблице 1:

Таблица 1

Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать при температуре +18–25° С в течение 10 минут. Измерения проводить при длине волны 546 нм (520–560) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Измерить величину оптической плотности калибровочной Ек и опытных проб Еоп против соответствующих холостых проб. Окраска устойчива в течение 1,5 часов после окончания инкубации.

Определение прямого билирубина
Компоненты реакционной смеси внести в пробирки в количествах, указанных в таблице 2:

Таблица 2
 
Содержимое пробирок тщательно перемешать и инкубировать точно 5 минут при температуре +18–25° С. Измерения проводить при длине волны 546 нм (520–560) нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

Измерить величину оптической плотности опытной пробы Еоп. против холостой пробы. 

РАСЧЕТЫ 
Определить по калибратору билирубина фактор (F) по формуле:
   Cк
F =    ------------------ ,
   Eк

где: Cк  – концентрация билирубина в калибраторе (указана на флаконе), мкмоль/л;
Eк – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плотн.
 
Содержание общего и прямого билирубина определить по формуле:

С = Еоп х F,

где:  Еоп – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плотн.;
F – фактор пересчета оптической плотности в мкмоль/л.

Примечание. При проведении большего количества анализов на общий и прямой билирубин, для удобства работы, можно смешать реактивы AT с BT или AD с BD в соотношении 20:1 и полученные растворы использовать в течение 8 часов. Значение фактора полученное для данного набора и прибора можно использовать в течение всего срока использования набора.

Анализ необходимо проводить в защищенном от света месте из-за светочувствительности азобилирубина.

Для проверки правильности проведения анализа использовать контрольные сыворотки  аттестованные данным методом.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2–8° С в течение всего срока годности. Допускается хранение  наборов  при температуре до +25° С не более 7 суток. 
AT, BT, AD, BD реактивы  после вскрытия флаконов могут храниться в укупоренном виде при температуре +2–25° С в течение всего срока годности набора.

Калибратор во флаконе может храниться в укупоренном виде в течение  8 часов при +25 °С, 3 суток при +2–8° С, или 2 недели при – 20°С после разведения. Хранить в темном месте! Повторное замораживание не допускается!

При концентрации билирубина выше, чем 452 мкмоль/л, исследуемый образец необходимо развести физраствором в соотношении 1:1, повторить анализ, полученный результат умножить на 2.
Срок хранения 2 года при +2–8° С.

Инструкцию по применению набора под автоматы высылаются по запросу.

По вопросам, касающимся приобретения наборов и их качества, просим обращаться по адресу: 105173, г. Москва, ул. Западная, д. 2, стр. 1, ООО «Агат–Мед». Телефон для справок: (495) 777-41-92.

Инструкция составлена: В.В. Гладуном  – главным технологом ООО «Агат-Мед», И.В. Тишкиной – научным сотрудником ООО «Агат-Мед», к.б.н. И.В. Смирновым – зав. лабораторией ГНЦ РАМН.

Назад к списку инструкций

Производство Агат-Мед
  • Контрольная сыворотка Биоконт-С

    Контрольная сыворотка Биоконт-С

    Информация
    Зарегистрированная сухая контрольная сыворотка промышленного производства
  • Масло иммерсионное

    Масло иммерсионное для микроскопии

    Информация
    Тип А (классическое) и тип Б (профессиональное) пониженной вязкости
  • ГЕМОГЛОБИН-КОНТРОЛЬ

    Стабилизированный концентрированный раствор гемоглобина и контрольные материалы на его основе

    Информация
    25 параметров аттестации перекрывают весь спектр анализов крови.