Автор: И.В.Смирнов, В.В.Гладун, А.А.Левина.

Применение реактива Эрлиха для скрининга заболеваний, связанных с нарушением порфиринового обмена

Гематологический Научный Цент РАМН, Москва, ИЧП «Агат», Москва.
(Проблемы гематологии и переливания крови, 1/98, стр.49—50.)

Увеличение выделения порфобилиногена (ПБГ) с мочой наблюдается при анемиях, связанных с нарушением порфиринового обмена. ПБГ является одним из главных маркеров острого состояния (атаки) при порфириях (острой перемежающей порфирии и порфирии Veriegata), в основе патогенеза которых лежат нарушения в синтезе гема, вызываемые дефицитом одного из ферментов его синтеза и экскрекцией с мочой предшественников — протопорфиринов.

Ввиду того, что клинически острые состояния при порфириях характеризуются комплексом терапевтических, нейрологических и психиатрических симптомов, таких как абдоминальные боли, тахикардия, гипертензия, поведенческие изменения, конвульсии, кома, парез дыхательной мускулатуры и др., определение ПБГ в моче наиболее целесообразно в нейрологических, психиатрических и хирургических стационарах.

В то же время при порфириях недопустимо применение целого ряда широко распространенных лекарств (барбитураты, этанол, хлорпропанид, сульфаниды и др.), поскольку они могут вызвать атаку порфирии. Поэтому определение ПБГ является основой для своевременной диагностики и адекватной терапии, поскольку в настоящее время существует препарат аргинат гематина (нормосанг), позволяющий купировать атаку при порфириях.

Обычно ПБГ, а также два других продукта порфиринового обмена — 5-d-аминолевулиновую кислоту (5-АЛК) и общие порфирины, количественно определяют методом колоночной хроматографии (например с применением наборов фирмы BioRad (США)). Определение этих показателей наиболее информативно для диагностики нарушений порфиринового обмена, однако реактивы эти чрезвычайно дороги, а методика сложна, что делает ее применение нецелесообразным в рамках рядового лечебного учреждения.

Определение ПБГ (а также 5-АЛК) можно проводить и по упрощенной схеме, применяя реактив Эрлиха, считая данный метод скринирующим, а при положительной реакции подтверждать указанными выше методами или обращаться в профильные лаборатории.

Реактив Эрлиха представляет собой раствор п-диметиламинобензальдегида 20 г/л в смеси ледяной уксусной и перхлорной кислот. При взаимодействии ПБГ с реактивом Эрлиха образуется порфобилиноген-альдегид, имеющий красную окраску. В качестве образца берется моча в первые 2—3 часа после мочеиспускания.

В ходе определения ПБГ к 0,5 мл мочи приливают 0,5 мл реактива Эрлиха. Реакцию следует считать положительной, если в первые 5 минут после добавления реактива Эрлиха произошло резкое изменение окраски (покраснение). При инкубации реакционной смеси более 5 мин возможно развитие окраски, не связанное с увеличением уровня ПБГ.

Используя хроматографические методы анализа, мы провели дифференциальную диагностику 65 больных, у которых наблюдались некоторые симптомы ОПП. У 25 больных диагноз ОПП был подтвержден. Применяя реактив Эрлиха по указанной методике, мы не обнаружили расхождения этого метода с данными колоночной хроматографии. Во всех положительных случаях наблюдалось резкое покраснение не позднее, чем через 1 мин, а в отрицательных — изменение окраски ранее, чем через 5 мин, не выявлено.

Учитывая тот факт, что в некоторых случаях при атаке при острой перемежающей порфирии вначале резко повышается содержание 5-d-аминолевулиновой кислоты (5-AЛК), которая также является предшественником порфиринов, рекомендуется, при наличии клинических симптомов и отрицательной пробы на ПБГ, провести определение 5-AЛК.

Для этого следует к 1 мл исследуемой мочи прибавить 0,5 мл ацетилацетона и пробу прогреть в водяной бане при 100.С в течение obr>10—15 мин. Затем прибавить 0,5 мл реактива Эрлиха и если в первые 5 минут произошло покраснение, то реакцию можно считать положительной.

Необходимо помнить, что в случае хранения мочи свыше 3 часов при комнатной температуре реакция может стать ложноотрицательной, что, по-видимому, связано с превращением ПБГ в порфирины и образованием ингибиторов реакции. Если нет возможности исследовать мочу в первые 2—3 часа, ее хранят в холодильнике при 4.С или в замороженном состоянии. При доведении рН мочи до 6,0—7,0 и хранении в холодильнике ПБГ стабилен длительное время.

Кроме того, посуда, используемая для проведения реакции должна быть свободна от следов моющих средств, которые могут вызвать ложноположительную реакцию.

При ярко выраженной положительной реакции на ПБГ или 5-АЛК и наличии клинических симптомов следует принять меры, необходимые для предупреждения атаки или ее купирования. Однако, данный метод является скрининговым, а его положительный результат лишь указывает на возможность наличия нарушений порфиринового обмена. Для установления диагноза, а также для определения динамики заболевания и его лечения требуется количественное определение ПБГ, АЛК, и общих порфиринов хромотографическим методом. Рекомендуется при обнаружении положительной реакции обращаться Гематологический Научный Цент РАМН (ГНЦ РАМН).

В настоящее время ООО «Агат-Мед» выпускает набор реактивов для качественного определения порфобилиногена в моче «ПБГ АГАТ».

Cайт Гематологического Научного Центра РАМН, посвященный порфирии

Назад к списку